滑石粉微生物学检验方法
发布日期：1994-12-01
1 主题内容与适用范围
本标准规定了滑石粉的微生物学检验方法及范围。
本标准适用于医药、食品及化妆品用滑石粉的微生物学检验。
2 术语
菌落总数：指样品经过处理，在一定条件下培养后，所得1g或1mL检样中所含细菌菌落
总数。
3 检验通则
3.1 取样及注意事项
3.1.1 每批滑石粉应随机抽两个或两个以上包装完好的单位，试样量不少于10g，以使检验
结果具有代表性。
3.1.2 凡异常的供试品，则选取有疑问的样品进行检验。凡包装开户可见霉变的、无须检
验即可判为不合格。
3.1.3 在检验前，应严格保持包装的原有状态，防止再污染。并放在阴凉干燥处。防止因
微生物再繁殖而影响检验结果。凡原包装已启开，则无代表性。
3.1.4 样品的稀释，须在1～2h内完成，以防止微生物繁殖或死亡。
3.1.5 微生物检验全过程，必须在无菌操作条件下进行，凡直接与样品接触的用具，均应
事先灭菌并保持无菌。
3.1.6 从样品检出致病菌的报告发出之日起，该菌菌种需保存一个月备查，阴性样品可及
时处理。
3.2 供试液制备的材料和仪器
a. 天平：感量0.1g；
b. 三角烧瓶：300mL或500mL；
c. 玻璃珠：φ5mm；
d. 量筒：100mL；
e. 电炉；
f. 高压消毒锅；
g. 滤纸。
3.3 供试液的制备方法
称10g试样，放入装有90mL稀释剂(生理盐水)和十几个玻璃珠的三角烧瓶中，经振摇制
成1∶10的试液备用。取用时必须混匀。
3.4 阳性菌株对照试验
3.4.1 每次检验，应同时进行阳性对照生长试验。
3.4.2 对照试验加入的已知活菌量，每批样品应控制在50～100个范围之内。
3.4.3 常用的阳性对照菌株，卫生部检定所编号：大肠杆菌44102、绿脓杆菌10104、金黄
色葡萄球菌26003等。
3.4.4 作阳性菌株对照试验时，应注意安全，严格防止对照菌污染样品和环境。
4 细菌总数测定方法
4.1 方法原理
每种细菌有它一定的生理特性、生长时对营养、温度、时间、pH、需氧性等的要求均不
相同。在实际培养中，不可能同时满足所有细菌的要求，因此只能测定在营养琼脂上发育的
嗜中温性需氧及兼性厌氧的细菌菌落总数。
4.2 材料和仪器
a. 恒温培养箱；
b. 电热恒温水锅；
c. 移液管：1mL及10mL；
d. 平皿：φ90mm；
e. 试管：18mm×200mm
f. 试管架；
g. 放大镜。
4.3 培养基和试剂
a. 营养琼脂培养基；
b. 生理盐水：定量分装于试管(每支试管内9mL)。
4.4 试验程序
1∶10试液
↓
做几个连续倍数的稀释液
↓
选择2～3个连续稀释度，各加1mL于相应平皿
↓
平皿加入12～15mL营养琼脂
36±1℃↓48±2h
菌 落 计 数
4.5 试验步骤
4.5.1 试液稀释及培养
4.5.1.1 用1mL移液管取1∶10试液1mL，沿管壁加入盛有9mL盐水的试管(管的尖端不要触及
液面)，振摇试管，作成1∶100均匀稀释液。
4.5.1.2 另取1mL移液管，按上述(4.5.1.1)操作制10倍递增稀释液，每次更换一支移液管
，稀释至10[-3]～10[-5]倍。
4.5.1.3 选择2～3个连续稀释度，用吸取该稀释度的移液管，移1mL试液于平皿内，每个稀
释度作2～3个平皿。
4.5.1.4 将预先放在45±1℃恒温水浴中的营养琼脂培养基，加入平皿约15mL，并转动平皿
混合均匀。同时再将营养琼脂15mL倾斜加入装有1mL不含试样的稀释剂平皿中，作为空白对
照。
4.5.1.5 琼脂凝固后，翻转平皿，置36±1℃培养箱内，48±2h取出进行菌落计数。平皿菌
落数乘以稀释倍数，即为每克样品所含菌落总数。
4.5.2 计数方法
4.5.2.1 用肉眼观察，必要时用放大镜。
4.5.2.2 求出同一稀释度各平皿的菌落平均值。若平皿中有连成大片的菌落生长，该平皿
不宜计数。若片状菌落不到平皿的一半，其余一半的分布又很均匀，可将此半个计数后乘以
2，代表全皿。
4.5.2.3 选择平均菌落数在30～300之间的平皿，作为菌落总数的测定范围。当只有一个稀
释度符合此范围，即以该平皿菌落数乘以稀释倍数(见下表中例1)。
4.5.2.4 有两个稀释度，平均菌落数均在30～300之间，则应求出两者菌落总数之比值决定
。小于或等于2，报告其平均数；大于2则报告其中较小的菌落数(见下表中例2及例3)。
4.5.2.5 所有稀释度，其平均菌落均大于300个，则按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍
数(见下表中例4)。
4.5.2.6 所有稀释度的平均菌落均小于30个，则按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数(
见下表中例5)。
4.5.2.7 所有稀释度的平均菌落均不在30～300个之间，则以最接近30或300的乘以稀释倍
数(见下表例6)。
4.5.2.8 所有稀释度均无菌落生长，为每克小于10个。
4.5.3 报告
菌落数在100以内，按实数值报告；大于100，采用二位有效数字乘以10的指数来表示，
有效数字后面的数值用修约法处理。以n/g为计量单位。
细菌计数结果及报告方法
________________________________________________________________________________
不同稀释度的平均菌落数 两稀释度 菌落总数 报告方式
例次
10[-1] 10[2] 10[3] 菌数之比 n/g n/g
________________________________________________________________________________
1 1365 164 20 - 16400 1.6×10[4]
2 2760 295 46 1.6 38000 3.8×10[4]
3 2890 270 60 2.2 27100 2.7×10[4]
4 不可计 4650 513 - 513000 5.1×10[5]
5 27 11 5 - 270 2.7×10[2]
6 不可计 305 12 - 30500 3.1×10[4]
________________________________________________________________________________
5 霉菌和酵母菌数测定方法
5.1 方法原理
真菌具有明显的细胞核，多数需氧，在偏酸含糖的培养基、较高湿度25～28℃的温度条
件下生产良好。本方法根据这些生物特性，进行培养和菌落计数。
5.2 材料和仪器
a. 恒温培养箱；
b. 振荡器；
c. 电热恒温水浴锅；
d. 试管：15mm×150mm；
e. 移液管：1mL和10mL；
f. 平皿：φ90mm；
g. 生物显微镜；
h. 载破片、盖破片。
5.3 培养基和试剂
a. 虎红琼脂培养基；
b. 蒸馏水：定量分装于试管(每支试管9mL)。
5.4 试验程序
1∶10试液
↓振荡30min
做几个连续倍数的稀释液
↓
选择3个连续稀释度，各加1mL于相应平皿
↓
每皿加入12～15mL培养基
25～28℃↓72h
菌 落 计 数
5.5 试验步骤
5.5.1 试液稀释及培养
5.5.1.1 将1∶10试液置振荡器中，振荡30min，使霉菌孢子充分散开。
5.5.1.2 按细菌总数测定4.5.1.1～4.5.1.2中规定的稀释方法，稀释至10[-1]～10[-4]。
5.5.1.3 根据试样污染程度，选择3个连续稀释度，分别移1mL稀释液于相应平皿中。
每个稀释度做2～3个平甲。然后将预先放在水浴锅中的45±1℃的虎红琼脂培养基，分
别加入约15mL，并转动平皿，混合均匀。同时按细菌总数测定中的方法，做空白对照。
5.5.1.4 待琼脂凝固后，倒置于25～28℃培养箱中，72±2h取出进行菌落计数。
5.5.2 计数方法
用肉眼观察，选择同一稀释度平均菌落数在5～50个之间的，乘以稀释倍数，作为霉菌
和酵母菌总数。计数和报告中所遇到的各种情况，按细菌总数测定4.5.2中的规则。
注：计数时，如不能肯定是霉菌和酵母菌，可取培养物涂片，直接镜检或革兰氏染色后
镜检。
6 大肠菌群、粪大肠菌群检验方法
6.1 方法原理
根据其所具有的生物学特性。如革兰氏阴性无芽胞杆菌，分别在37℃和44℃、24～48h
能发酵乳糖、产酸、产气，并能在选择性培养基上产生典型菌落，能分解色氨酸产生靛基质
等。
6.2 材料和仪器
a. 恒温培养箱；
b. 电热恒温水浴；
c. 试管及小倒管：15mm×150mm；
d. 移液管：1mL、10mL；
e. 平皿：φ90mm；
f. pH试纸；
g. 生物显微镜；
h. 载破片和盖破片。
6.3 培养基和试剂
a. 乳糖胆盐培养基；
b. 伊红美兰琼脂(EMB)；
c. 革兰氏染色液；
d. 蛋白胨水；
e. 靛基质试剂；
f. 乳糖发酵培养基。
6.4 试验程序
1∶10试液
↓
做三个连续稀释度
↓
乳糖胆盐发酵管
36±1℃↓48h
_________________________
↓ ↓
不产酸、不产气 产酸、产气
↓ ________________________
阴性 ｜ ｜
乳糖胆盐发酵管 证实试验
44℃↓～48h ↓
________________ ____________
↓ ↓ ↓ ↓
不产酸、产气 产酸、产气 EMB平板 乳糖发酵
↓ ↓
阴性 _________________
↓ ↓
靛基质试验 EMB平板
36±1℃↓24h
梁色镜检
6.5 试验步骤
6.5.1 试液稀释
6.5.1.1 用1∶10试液，按细菌总数测定4.5.1.1～4.5.1.2中的方法做10倍递增稀释液。
6.5.1.2 根据样品的污染情况，选择三个连续稀释度。
6.5.2 大肠菌群
6.5.2.1 将试液分别接种于预先装有10mL乳糖胆盐培养基的试管内，每管1mL，每一稀释度
接种3管，置36±1℃培养48h，如所有试管内部不产酸，不产气，则可报告大肠菌群阴性。
如有产气、产酸者则需按6.5.2.2进一步做证实试验。
6.5.2.2 划线接种于EMB平皿，置36±1℃，培养18～24h，取出观察形态，挑取可疑菌落做
染色镜检，同时做乳糖发酵试验，凡乳管产气、镜检为革兰氏阴性无芽胞杆菌，即可报告大
肠菌群阳性。
6.5.3 粪大肠菌群
6.5.3.1 将第一次产酸、产气的乳糖胆盐培养物，分别以1mL接种于各乳糖胆盐发酵管内，
置44±0.5℃水浴锅，培养24～28h。如所有乳糖胆盐发酵管都不产酸，不产气，则可报告粪
大肠菌群阴性，如产酸、产气，则进行6.5.3.2～6.5.3.5程序。
6.5.3.2 划线接种于EMB平皿，置36±1℃，培养18～24h，同时接种于蛋白胨水，置44±0.
5℃培养24h。
6.5.3.3 经培养后，在EMB平皿上典型大肠菌群菌落，呈深紫黑色，圆形、边缘整齐，表面
光滑湿润。常见有金属光泽。也有的呈紫黑色，不带或略带金属光泽，或粉紫色，中心较深
的菌落。
6.5.3.4 挑取上述可疑菌落，涂片作革兰氏染色镜检。
6.5.3.5 在蛋白胨水培养液中，加入靛基质试剂0.5mL，阳性反应则液面呈现玫瑰红色，阴
性反应液面呈试剂本色。
6.5.3.6 平皿上有典型菌落，经证实为革兰氏阴性短杆菌，靛基质试验阳性，则报告粪大
肠菌群阳性。
7 绿脓杆菌检验方法
7.1 方法原理
根据本菌生物学特征：革兰氏阴性杆菌、氧化酶试验阳性，能产生绿脓菌素。此外还能
液化明胶，还原硝酸盐为亚硝酸盐。在42℃条件下生长等，可与类似菌相区别。
7.2 材料和仪器
a. 恒温培养箱；
b. 冰箱；
c. 三角烧瓶：500mL、300mL；
d. 试管：φ18mm×200mm；
e. 平皿：φ90mm；
f. 移液管：1mL、10mL；
g. 生物显微镜；
h. 载破片及盖破片；
i. 接种环及针；
j. 酒精灯；
7.3 培养基和试剂
a. 营养琼脂培养基(普通肉汤培养基)；
b. 十六烷三甲基溴化铵培养基；
c. 乙酰胺培养基；
d. 绿脓菌色素测定用培养基；
e. 明胶培养基；
f. 硝酸盐蛋白胨水培养基；
g. 1%的二甲基对苯二胺试液；
h. 三氯甲烷(氯仿)；
i. 1mol/L的盐酸。
7.4 试验程序
1∶10试液
↓
普通肉汤培养液，增菌
37℃↓18～24h
十六烷三甲基溴化铵培养基、分离培养
37℃↓18～24h
普通肉汤培养基、纯培养
37℃↓18～24h
__________________________
↓ ↓
染色镜检 生化试验
_________________
↓ ↓
氧 绿 硝 产 明 42℃
化 脓 酸 气 胶 生
酶 菌 盐 试 液 长
试 素 还 验 化 试
验 试 原 试 验
验 产 验
气
试
验
7.5 试验步骤
7.5.1 增菌：取1∶10试液10mL，放入装有90mL普通肉汤培养液的三角烧瓶中，在37℃下培
养18～24h，有绿浓菌生长时，培养液表面多有一层薄菌膜，且呈黄绿色或蓝绿色。
7.5.2 分离培养：挑取增菌培养物，划线接种在十六烷三甲基溴化铵琼脂平皿上(也可划线
接种在乙酰胺培养基上)。在37℃培养18～24h，在培养基上，菌落扁平无定型、呈灰白色。
向周边扩散或略有蔓延、表面湿润，周围的培养基常扩散有水溶性色素(在乙酰胺培养基上
，菌落扁平、边缘不整齐，周围的培养基略带粉红色，而其他菌不生长)。
7.5.3 纯培养：挑取可凝绿脓杆菌的分离培养物菌落2～3个放入肉汤培养基，在37℃培养1
8～24h。
7.5.4 染色镜检：挑取可疑菌落、涂片、革兰氏染色，经镜检为阳性者，进行氧化酶试验
。
7.5.5 氧化酶试验；取一小块白色滤纸，放在平皿内，用玻璃棒挑取绿脓杆菌的可疑菌落
，涂在滤纸上，加1滴新配制的二甲基对苯二胺试液(1%)，30s内出现粉红色或紫红色，为阳
性；若培养物不变色，氧化酶试验为阴性。
7.5.6 绿脓杆菌试验：取可疑菌落2～3个，分别接种在绿脓菌素测定培养基上，在37℃培
养24h，加入氯仿3～5mL，充分振荡使培养物中的绿脓菌素溶解于氯仿液内，待氯仿提取液
呈蓝色时，用移液管将氯仿移到另一试管中并加入1mol/L的盐酸1mL左右，振荡后静置片刻
。如上层盐酸液内出现粉红色到紫红色时为阳性，说明样品中有绿脓菌素存在。
7.5.7 硝酸盐还原产气试验：挑取被检的纯培养物，接种在硝酸盐胨水培养基中，置37℃
培养24h，观察结果。凡在硝酸盐胨水培养基内的小试管中有气体者，为阳性。表明该菌能
还原硝酸盐，并将亚硝酸盐分解产生氧气。
7.5.8 明胶液化试验：取绿脓杆菌可疑菌落的纯培养物，穿刺接种在明胶培养基内，在37
℃培养24h，取出放入冰箱(0～4℃)10～30min，仍呈溶解状，为阳性凝固不溶解者为明胶液
化试验阴性。
7.5.9 42℃生长试验：挑取纯培养物，接种在普通琼脂斜面培养基上，在42±1℃，培养24
～48h，绿脓杆菌能生长，为阳性。
7.6 试验结果：试样经增菌、分离培养、证实为革兰氏阴性杆菌，氧化酶及绿脓菌素试验
均为阳性者，样品判为有绿脓杆菌；绿脓菌素试验阴性而液化明胶，硝酸盐还原产气和42℃
生长试验皆为阳性时，仍判样品中有绿脓杆菌。
8 金黄色葡萄球菌检验方法
8.1 方法原理
根据本菌的特有形态及培养特性，应用Baird-parker平皿进行分离，该平皿中的氯化锂
可抑制革兰氏阴性细菌生长，丙酮酸钠可刺激金黄色葡萄球菌生长，提高检出率，并利用分
解甘露醇和血浆凝固酶等特征，以兹鉴别。
8.2 材料与仪器
a. 生物显微镜；
b. 恒温培养箱；
c. 离心机；
d. 移液管：1mL、10mL；
e. 试管：φ15mm×150mm；
f. 三角烧瓶：500mL或300mL；
g. 载破片、盖破片；
h. 接种环或针；
i. 酒精灯。
8.3 试剂和培养基
a. 7.5%的氯化钠肉汤；
b. Baird-parker平皿；
c. 血琼脂培养平皿；
d. 甘露发酵培养基；
e. 盐水；
f. 血浆。
8.4 试验程序
1∶10试验
↓
7.5%的氯化钠肉汤、增菌
36±1℃↓24h
Brird-parker 平皿、分离培养
36±1℃↓24～48h
血琼脂平皿、纯培养
36±1℃↓24h
_____________________________
↓ ↓ ↓
染色镜检 甘露醇发酵试验 血浆凝固酶试验
8.5 试验步骤
8.5.1 增菌：取1∶10试液10mL，放入装有90mL7.5%的氯化钠肉汤的三角烧瓶中，在36±1
℃培养24～48h。Baird-parker平皿上有圆形光滑凸起，湿润直径为2～3mm，呈灰色到墨色
，边缘色谈，周围呈一浑浊带，外层有一透明带。无Baird-parker培养基可划线接种在血琼
脂平皿上培养。血琼脂平皿上的菌落呈金黄色，大而突起，圆形不透明，表面光滑，周围有
溶血圈。
8.5.3 纯培养：从分离培养皿上，挑取单个疑似菌落接种于血琼脂平皿上，在36±1℃下培
养24h。
8.5.4 染色镜检：挑取纯培养的疑似菌落进行涂片和革兰氏染色、镜检。金黄色葡萄球菌
为革兰氏阳性菌，排列成葡萄状，无牙胞，无荚膜。致病性葡萄球菌，菌体较小，直径约为
0.5～1μm。
8.5.5 甘露醇发酵试验；取纯培养菌落接种到甘露醇发酵培养基中，在36±1℃培养24h。
金黄色葡萄球菌能发酵甘露醇产酸，培养基呈红色。
8.5.6 血浆凝固酶试验：吸取1∶4的新鲜兔血浆0.5mL，放入试管，加入待检的增菌24h肉
汤培养物0.5mL。混匀后放入36±1℃的培养箱或水浴锅中，每半小时观察一次，24h之内呈
现凝块，为阳性。同时用已知血浆凝固酶试验阳性和阴性菌株，作为对照。
8.6 试验结果
上述选择平皿上有可疑菌落生长，经染色镜检，证明为革兰氏阳性葡萄球菌，并能发酵
甘露醇产酸，血浆凝固酶试验阳性者，表明样品中有金黄色葡萄球菌。
附 录 A
微生物学检验的有关培养基和试剂
(补充件)
A1 营养琼脂培养基(肉汤琼脂培养基)
a. 成分
蛋白胨 10g
氯化钠 5g
琼 脂 15g
牛肉膏 3g
蒸馏水 1 000mL
b. 制 法
将蛋白胨、氯化钠、琼脂、牛肉膏加到蒸馏水中，微温使溶，再加热煮沸，待琼脂完全
溶化后，混匀，用1mol/L NaOH溶液调pH值为7.4±0.2，过滤，分装于三角烧瓶，经121℃，
高压灭菌20min后，贮存0～4℃冷暗处备用。
A2 虎红琼脂培养基
a. 成 分
蛋白胨 5g
葡萄糖 10g
磷酸二氢钾 1g
硫酸镁(MgSO4·7H2O) 0.5g
琼 脂 20g
4/3000虎红水溶液 100mL
蒸馏水 900mL
b. 制 法
将上述(除虎红水溶液外)各成分，分别加于蒸馏水中，加热溶解，过滤，再加入虎红水
溶液(四氯四碘荧光素溶液)，同A1中b项分装后，在121℃高压灭菌20min。
A3 乳糖胆盐培养基
a. 成 分
蛋白胨 20g
猪胆盐 5g
乳 糖 5g
0.4%溴甲酚紫水溶液 2.5mL
蒸馏水 1 000mL
b. 制 法
将蛋白胨、猪胆盐及乳糖溶于蒸馏水中，调pH值为7.4，加入指示剂(0.4%溴甲酚紫水溶
液)混匀，分装于有小倒管的试管中(见A12中b项)，置于115℃高压灭菌20min。
A4 伊红美兰(EMB)琼脂
a. 成 分
蛋白胨 10g
乳 糖 10g
磷酸二氢钾 2g
琼 脂 20g
2%伊红水溶液 20mL
0.5%美兰水溶液 13mL
蒸馏水 1 000mL
b. 制 法
先将琼脂加到900mL蒸馏水中，加热溶解，然后加入磷酸二氢钾、蛋白胨混匀，使之溶
解，再以蒸馏水补足至1 000mL，调pH值为7.2～7.4，分装于烧瓶内，在121℃高压火菌15mi
n后备用。用时，加入乳糖并加热融化琼脂，在60℃左右以无菌手续加入灭菌的伊红、美兰
溶液，摇匀，倾注平皿使用。
A5 蛋白胨水
a. 成 分
蛋白胨 20g
氯化钠 5g
蒸馏水 1 000mL
b. 制 法
将上述成分加热熔化，调pH值为7.0～7.2，分装小试管，经121℃高压灭菌15min。
A6 靛基质试剂(柯凡克试剂)
a. 成 分
戊 醇 75mL
对二甲氨基苯甲醛 5g
浓盐酸 25mL
b. 制 法
将对二甲氨基苯甲醛加入戊醇中，搅动使之完全溶解，然后1滴1滴缓慢地加入盐酸25mL
。
A7 革兰氏染色液
A7.1 染液制备
A7.1.1 结晶紫染色液
a. 成 分
结晶紫 1g
95%乙醇 20mL
1%草酸铵水溶液 80mL
b. 制 法
将结晶紫溶于乙醇中，然后与草酸溶液混合。
A7.1.2 革兰氏碘液
a. 成 分
碘 1g
磺化钾 2g
蒸馏水 300mL
b. 制 法
将碘与碘化钾进行混合，加入蒸馏水少许，充分振摇，待完全溶解后，再加蒸馏水至30
0mL。
A7.1.3 脱色液：95%乙醇
A7.1.4 复染液
A7.1.4.1 沙黄复染液
a. 成 分
沙 黄 0.25g
95%乙醇 10mL
蒸馏水 90mL
b. 制 备
将沙黄溶解于乙醇中，然后用蒸馏水稀释。
A7.1.4.2 稀石炭酸复红液
a. 成 分
碱性复红 10g(研细) 第一步
95%乙醇 100mL
5%石炭酸水溶液 90mL 第二步
蒸馏水 90mL
b. 制 法
将碱性复红加入乙醇，放约12h，过滤。取该溶液10mL，加入5%石炭酸水溶液，混合；
再取此液10mL加入蒸馏水，即为(1∶10)稀石碳酸复红液。
A7.2 染色法
A7.2.1 将涂片在火焰上固定，滴加结晶紫染色液，染1min，水洗。
A7.2.2 滴加革兰氏碘液，作用min，水洗。
A7.2.3 滴加95%乙醇脱色，约30s。
A7.2.4 滴加复染液(沙黄)，复染1min，水洗，待干，镜检(注：用稀石炭酸复红液复染，
仅需10s)。
A7.3 染色结果
革兰氏阳性菌呈紫色，革兰氏阴性菌呈红色。
A8 十六烷三甲基溴化铵培养基
a. 成 分
牛肉膏 3g
蛋白胨 10g
氯化钠 5g
十六烷三甲基溴化铵 0.3g
琼 脂 20g
蒸馏水 1 000mL
b. 制 备
将除琼脂外的其他成分混合，加热溶解，调pH值为7.4～7.6，加入琼脂，经115℃高压
灭菌20min后，制成平皿备用。
A9 乙酰胺培养基
a. 成 分
乙酰胺 10g
氯化钠 5g
无水磷酸氢二钾 1.39g
无水磷酸二氢钾 0.73g
硫酸镁(MgSO4·7H2O) 0.5g
酚 红 0.012g
琼 脂 20g
蒸馏水 1 000mL
b. 制 法
除琼脂和酚红外，将其他成分加到蒸馏水中，加热溶解调pH值为7.2，加入琼脂、酚红
经121℃高压灭菌20min后，制成平皿备用。
A10 绿脓菌色素测定用培养基
a. 成 分
蛋白胨 20g
氯化镁 1.4g
硫酸钾 10g
琼脂 10g
丙三醇(甘油)(化学纯) 10g
蒸馏水 1 000mL
b. 制 法
将蛋白胨、氯化镁和硫酸钾加到蒸馏水中，加温使之溶解，调pH值为7.4，加入琼脂和
甘油，加热溶解，分装于试管内，115℃高压灭菌20min后，制成斜面备用。
A11 明胶培养基
a. 成 分
牛肉膏 3g
蛋白胨 5g
明 胶 120g
蒸馏水 1 000mL
b. 制 法
取各成分加在蒸馏水中浸泡20min，随时搅拌加温使之溶解，调pH值为7.4，分装于试管
内，经115℃高压灭菌20min后，直立放置凝后备用。
A12 硝酸盐蛋白胨水培养基
a. 成 分
蛋白胨 10g
酵母浸膏 3g
硝酸钾 2g
亚硝酸钠 0.5g
蒸馏水 1 000mL
b. 制 法
将蛋白胨和酵母浸膏加到蒸馏水中，加温使之溶解，调pH值为7.2，煮沸过滤后补足液
量，加入硝酸钾和亚硝酸钠，溶解混匀，分装到加有小倒管的试管中，经115℃高压灭菌20m
in后备用。
A13 7.5%的氯化钠肉汤
a. 成 分
蛋白胨 10g
牛肉膏 3g
氯化钠 75g
蒸馏水 1 000mL
b. 制 法
将上述成分放入蒸馏水中加热溶解，调pH值为7.4，分装后经121℃高压灭菌15min。
A14 Baird-parker平皿
a. 成 分
胰蛋白胨 10g
牛肉膏 5g
酵母浸膏 1g
丙酮酸钠 10g
甘氨酸 12g
氯化锂(LiCl·6H2O) 5g
琼 脂 20g
蒸馏水 950mL
b. 制 法
将各成分加到蒸馏水中，加热煮沸完全溶解，冷至25℃，调pH值为7.0±0.2。分装每瓶
95mL，经121℃高压灭菌15min。临用时，加热溶化，每95mL加入预热至50℃的卵黄亚碲酸钾
增菌剂5mL，摇匀后倾注平皿。培养基应是致密不透明的。使用前在冰箱贮存不得超过48h(
注：增菌剂的配制：30%的卵黄生理盐水50mL，与除菌过滤1%亚碲酸钾溶液10mL混合，保存
于冰箱内)。
A15 血琼脂培养基
a. 成 分
营养琼脂 100mL
脱纤维兔血浆 10mL
b. 制 法
将营养琼脂加热溶化，待冷至50℃左右，以无菌手续加入脱纤维兔血浆，摇匀，制成平
皿，置冰箱内备用。
c. 血浆制备
取3.9%柠檬酸钠溶液(121℃灭菌30min)。每1份加入全血4份，混匀静置，2 000～3 000
r/min离心3～5min。血球下沉，取上面血浆。
A16 甘露醇发酵培养基
a. 成 分
蛋白胨 10g
氯化钠 5g
甘露醇 10g
牛肉膏 5g
0.2%溴麝香草酚蓝溶液(指示剂) 12mL
蒸馏水 1 000mL
b. 制 法
将蛋白胨、氯化钠、牛肉膏加到蒸馏水中，加热溶解，调pH值为7.4，加入甘露醇和指
示剂，混匀后分装试管中，经115℃高压灭菌20min后备用。
A17 乳糖发酵培养基
a. 成 分
蛋白胨水 2g
氯化钠 3g
磷酸氢二钠(Na2HPO4·12H2O) 2g
0.4%溴麝香草酚蓝液(BTB) 6mL
乳 糖 5g
蒸馏水 1 000mL
b. 制 法
除乳糖和BTB外的其他成分，加在蒸馏水中，微湿溶解，调pH值为7.4，加入乳糖和BTB
，混匀，分别装于有倒管的试管内，每管约5mL，经115℃高压灭菌20min后备用。
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附加说明：
本标准由国家建筑材料工业局碱阳非金属矿研究所负责起草。
本标准主要起草人潘宇清。
